آزمایشات باکتریولوژیکی آب آشامیدنی با هدف یکسان سازی روش آزمایش

آزمایشات باکتریولوژیکی آب آشامیدنی با هدف یکسان سازی روش آزمایش

آزمایشات باکتریولوژیکی آب آشامیدنی با هدف یکسان سازی روش آزمایش

فرمت:PDF  تعداد صفحات: 25

فهرست:

1. روش تخمیر چند لوله ای

   • تست احتمالی

   • تست تأییدی

2. محاسبه MPN

3. تخمیر چند لوله ای برای آب های غیر آلوده

4. تست تکمیلی

5. روش صافی غشای

6. آزمایش شمارش بشقابی باکتری ها

7. روش p – A ) presence – absence)

8. روش تأخیری جهت تعیین کلیفرم ها

9. تشخیص افتراقی کلیفرم ها

10. زمان نگهداری برای محیط کشت های آماده شده

11. معیار های شاخص میکروبی مناسب آب

12. گزینه های مختلف به عنوان شاخص میکروبی

تست احتمالی (تخمیر چند لوله ای) Presumptive test

وسایل مورد نیاز: وسایل عمومی میکروبیولوژی عملی (اتوکلاو – کوره هوای داغ، انکوباتور یا اتوو، لوله های آزمایش، جای لوله های آزمایش، پی پت های استریل 10cc، 1cc چراغ الکلی یا شعله گاز)

محیط کشت مورد نیاز: لوریل تریپتوز برات، لاکتوز برات، مک کانگی برات

مواد تهیه آب رقیق سازی: پتاسیم دی هیدروژن فسفات، هیدروکسید سدیم، آب مقطر

هدف آزمایش: تعیین احتمال وجود کلیفرها ( مجموع کلیفرم ها)

روش کار:

1. تهیه محیط کشت: طبق مشخصات داده شده توسط کارخانه سازنده مقدار مشخص از محیط کشت را با ترازوی دقیق توزین نموده و در آب مقطر حل می کنیم (حجم محیط کشت لازم بستگی به تعداد نمونه های آب جهت آزمایش می باشد) (در این آزمایش محیط کشت با غلظت معمولی و غلظت دو برابر لازم است بعد از اینکه محیط کشت را به آب مقطر اضافه می کنیم، اختلاط و حرارت می دهیم تا بخوبی حل شده و شفاف گردد.
2. محیط کشت تهیه شده: بصورت محلول را بین لوله های آزمایش که دارای لوله های دورهام بطور وارونه می باشند توزیع می کنیم معمولا به هر لوله آزمایش 10cc محیط کشت اضافه می شود. در روش 15 لوله ای (3 رقت 5 لوله ای)، به 10 لوله محیط کشت با غلظت معمول و به 5 لوله محیط کشت با غلظت دو برابر اضافه می نمائیم.) درب لوله های آزمایش را می گذاریم. یا پنبه گذاری می کنیم.
3. استریل نمودن لوله های حاوی محیط کشت – اتو کلاو . حرارت 120 C° به مدت 15 دقیقه. قبل از کشت دادن لوله ها باید تا درجه حرارت اتاق سرد گردد.
4. تهیه آب رقیق سازی : 34 گرم پتاسیم دی هیدروژن فسفات را در 500 میلی لیتر آب مقطر حل می کنیم، pH این محلول باید 7.2 باشد. در صورتی که نیاز به افزایش pH باشد می توان از چند قطره محلول یک مول در لیتر هیدروکسید سدیم استفاده نمود (4 گرم هیدروکسید سدیم در 100 میلی لیتر آب مقطر) سپس حجم محلول بدست آمده را به یک لیتر می رسانیم. (این محلول استوک در یک بطری در بسته در حرارت 4 – 10°C نگهداری می شود)
   برای تهیه آب رقیق سازی 1.25 میلی لیتر از محلول غلیظ اصلی و 5ml محلول کلرور منیزیم را به یک لیتر آب مقطر اضافه می کنیم و استفاده می نمائیم.
   آب رقیق سازی در این آزمایش برای تهیه رقت 0.1 بکار می رود که 9 میلی لیتر از آب رقیق سازی تهیه شده را در بطری های با حجم حدود 50 تا 100 میلی لیتر می ریزیم. و قبل از آزمایش آنها را استریل می نمائیم. قبل از آزمایش باید آب رقیق سازی سرد گردد.
5. کشت دادن: کشت دادن به معنی اضافه نمودن حجم مشخص از نمونه آب به لوله های حاوی محیط کشت است. این عمل در کنار شعله و با رعایت مواردی که باعث آلودگی ثانویه و خارجی نگردد انجام می شود.
   بطری حاوی آب را محکم تکان می دهیم تا باکتری ها بطور یکسان در آب منتشر شوند. با یک پی یت استریل 10 میلی لیتری 10 میلی لیتر از نمونه را در داخل هر یک از 5 لوله ای که حاوی 10ml از محیط کشت احتمالی (با غلظت دو برابر) است کشت می دهیم. لازم است لوله ها را به آهستگی تکان دهیم تا نمونه بطور یکسان در محیط کشت پخش شود.
   در 5 لوله بعدی که حاوی محیط کشت با غلظت معمول است، با یک پی پت استریل یک میلی لیتری، یک میلی لیتر از نمونه را اضافه می کنیم.
   در 5 لوله آخر، باید 0.1 میلی لیتر آب کشت داده شود. بدین منظور ابتدا 1 میلی لیتر از نمونه را با استفاده از پی پت استریل به بطری حاوی 9 میلی لیتر آب رقیق سازی اضافه می نمائیم و بعد از اختلاط یک ml از نمونه را به هر لوله حاوی محیط کشت اضافه می نمائیم.
6. گرمخانه گذاری: بعد از تکان دادن لوله ها، جا لوله ای محتوی 15 لوله را به مدت 24 ساعت در اتو 0.5 ± 35 درجه سانتیگراد قرار می دهیم.
7. دیدن نتایج بعد از 24 ساعت: پس از 24 ساعت لوله ها را برای تشکیل گاز مشاهده می نمائیم اگر گازی موجود باشد در داخل لوله دورهام قابل رؤیت است. لوله ها را به آرامی تکان می دهیم اگر هر گونه کف تعداد زیادی حباب ریز) مشاهده گردید لوله باید مثبت تلقی شود. تعداد لوله های مثبت بعد از 24 ساعت را در جدول یادداشت می کنیم. لوله های منفی را 24 ساعت دیگر در اتو قرار می دهیم.
8. دیدن نتایج بعد از 24 ساعت دیگر: پس از 24 ساعت دیگر مجدد لوله ها را برای تولید گاز مانند مرحله 7 بررسی می کنیم تولید گاز در پایان 24 یا 48 ساعت احتمالا به خاطر وجود کلیفرم در نمونه بوده است.

ادامه مطلب را با دانلود فایل پیوستی مشاهده کنید.